העמותה מתנגדת בתוקף להרדמת בעלי חיים ודואגת להעניק לבעלי החיים החוסים בה את התנאים הקרובים ביותר לבית בכל זמן שהותם בבית המחסה. הצוות מקדיש את זמנו בשיקומם של בעלי החיים הללו במטרה להגביר את סיכויי האימוץ שלהם. 

בנוסף לניהול בית מחסה, העמותה מאמינה בטיפול בבני אדם באמצעות בע"ח, ולכן פועלת מול נוער במצוקה, נפגעי נפש, לוקים בפיגור שכלי, נוער בסיכון גבוה, אוכלוסייה קשישה, שיתוף פעולה עם השב"ס, אל- סם, אקי"ם, ועוד.

בזכות פעילויותה ועמידה בסטנדרטים גבוהים, עמותת "צער בעלי חיים ברחובות" חברה ב-WSPA ו-RSPCA, שני אירגונים עולמיים חשובים לשמירה והגנה על זכויות בעלי חיים.